FAQs

Immunhistochemie

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Warum erhalte ich kein Färbeergebnis?

Keine Anfärbung auf sämtlichen Objektträgern

Primär-Antikörper, Link oder Label wurde weggelassen
Unsachgemäße Prozedur: Reagenzien wurden in falscher Reihenfolge verwendet
Bei alkohollöslichen Chromogenen (z. B. AEC, Fast Red, Tetrazolium Salze) sind alkoholische Reagenzien benutzt worden.
Unsachgemäße Anfertigung des Substrat/ Chromogen-Gemisches
Natriumazid befindet sich im Peroxidase-Markierungsenzym
Thimerosal befindet sich im Alkalische Phosphatase-Markierungsenzym

Nur Anfärbung der Positiv-Kontrolle

Kein oder nur in sehr niedrigen Konzentrationen vorhandenes Antigen in der Gewebeprobe
Gewebeprobe ist zu lang in Formalin fixiert worden. Antigen maskiert durch Aldehyd-Crosslinking und erhöhte Hydrophobizität des Gewebes. (Es ist wahrscheinlich möglich, mit Hitze-induzierter Demaskierung oder enzymatischem Andau die Antigenizität wieder zurückzugewinnen)
Antigen ist denaturiert durch das Fixations- oder Einbettungsverfahren. Gewebeproben sollten nicht über 60°C erwärmt werden.

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Warum sind alle Objektträger überfärbt?

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Warum sind alle Objektträger zu schwach gefärbt?

Notwendige Vorbehandlung (Hitze-induzierte Demaskierung oder enzymatischer Andau) vergessen
Konzentration des Primär-Antikörpers ist zu niedrig
Inkubationszeit des Primär-Antikörpers ist zu kurz
Inkubationstemperatur des Primär-Antikörpers ist zu niedrig
Natriumazid befindet sich im Peroxidase-Markierungsenzym
Thimerosal befindet sich im Alkalische Phosphatase-Markierungsenzym
Substrat ist alt
Zu viel Waschpuffer ist auf dem Objektträger zurückgeblieben, der eine starke Verdünnung der Reagenzien bewirkt.
Unverträgliche Gegenfärbung oder das Eindeckmedium löst das Reaktionsprodukt auf

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Warum erhalte ich eine Hintergrundfärbung?

Endogene Peroxidase im Gewebe. Peroxid-Block ist notwendig.
Endogene Alkalische Phosphatase im Gewebe. Blockierung mit Levamisol kann z.T. Abhilfe schaffen.
Falsches Blockierungsserum verwendet. Blockierungsserum soll von der gleichen Tierspezies stammen wie der Link.
Nichtspezifische Proteinbindung im Gewebe. Protein-Block ist notwendig.
Ungenügendes Waschen, insbesondere nach dem Label und nach der Substrat-/Chromogen-Reaktion
Primär-Antikörper zu konzen-triert
Unvollständige Deparaffinierung
Substratreaktion zu lang
Gewebe während der Färbeprozedur getrocknet.
Antigen-Diffusion fand vor dem Fixierungsvorgang statt. Verzögerungen in der Gewebeverarbeit-ung sollten vermieden werden.
Zerstörte Morphologie oder Verlust zellulärer Details. Exzessive Proteinandauung sollte vermieden werden. Zerstörtes Gewebe und nekrotische Herde in gefärbten Gewebeproben sollten nicht ausgewertet werden.

DCS